一种快速精确编辑疱疹病毒基因组的方法

作者：孙爱军; 王向茹; 杨帅康; 刘莹; 张改平; 庄国庆^*

来源：生物工程学报, 2021, 37(04): 1376-1384.

DOI：10.13345/j.cjb.200419

• 马立克氏病病毒
• 同源重组
• 细菌人工染色体
• 基因组编辑

为了快速且准确地对疱疹病毒基因组进行基因敲除、插入或者点突变等修饰,通过同源重组将马立克氏病病毒(MDV)超强毒株Md5基因组克隆到细菌人工染色体(BAC)。将筛选的阳性重组体DNA电转进DH10B菌株,用PCR及限制性片段多态分析(RFLP)方法鉴定含Md5全基因组的BAC克隆。将阳性重组体DNA转染入鸡胚成纤维细胞(CEF),拯救出重组病毒,命名为Md5BAC。进一步利用Red酶介导的两步法基因重组技术构建MDVlorf10基因敲除毒株。为了验证被敲除基因功能的特异性,将lorf10插入原位点以构建基因复原毒株。将构建的重组毒株分别感染CEF细胞,用间接免疫荧光试验确认重组病毒均包装成功;病毒生长曲线结果表明,lorf10敲除不影响病毒的体外增殖。总之,这为其他疱疹病毒的基因组编辑提供了技术参考。

• 单位
  河南农业大学