河北省致犊牛腹泻主要病原多重PCR检测方法的建立

作者：高亚桃; 李妍; 刘立元; 王猛; 郭姚蕊; 刘胜丽; 马亚宾; 蒋桂娥; 刘志勇; 秦建华^*; 赵月兰^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(10): 1930-1936.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.10.07

• 牛病毒性腹泻病毒
• 牛轮状病毒
• 牛传染性鼻气管炎病毒
• 多重PCR

为建立一种能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BVDV的5′-UTR序列、BRV的VP6基因和IBRV的gB基因设计3对特异性引物,通过对反应条件的优化,建立了一种多重PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法对牛冠状病毒(BCoV)、牛细小病毒(BPV)、牛隐孢子虫没有交叉反应,特异性较好;灵敏性试验结果显示,该方法对BVDV、BRV和IBRV的最低检出限分别为1.44×105,1.38×105,1.2×105 copies/μL。利用该方法对从河北省部分地区采集的50份犊牛腹泻粪便样品进行检测,结果显示,BVDV和BRV混合感染检出率为18%(9/50),BVDV和IBRV混合感染检测率为14%(7/50),BRV和IBRV混合感染检测率为22%(11/50),3种病毒混合感染率为4%(2/50)。多重PCR检测和单一PCR检测方法均能检出被检样品中的病原,两种方法的总符合率分别为BVDV 90%、BRV 84%和IBRV 88%。该方法比单一PCR检测方法检测阳性率高,优于单一PCR检测方法,表明该方法可应用于临床检测。本研究建立的多重PCR检测方法,能快速、有效、准确地检测出BVDV、BRV和IBRV 3种病毒,对于流行病学调查及疾病的诊断等具有重要意义。

• 单位
  河北农业大学