摘要
目的:观察牛膝甾酮调控miRNA-98-5p对激素性股骨头坏死(steroid induced osteonecrosis of the femoral head, SONFH)大鼠骨髓间充质干细胞(bone manrrow mesenchymal stemcells, BMSC)自噬及成骨分化的影响,并探讨相关机制。方法:10只SD大鼠建立SONFH模型,提取股骨、胫骨骨髓BMSC进行培养。将miR-98-5p过表达质粒miR-98-5p mimics转染至BMSC后分为转染组、牛膝甾酮联合转染组(10 mg·L-1),另取第3代BMSC分为对照组、牛膝甾酮组(10 mg·L-1)。qRT-PCR检测细胞miR-98-5p相对表达量;Western blot法检测细胞Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2 interaction protein 1,CKIP-1)蛋白表达量;对-硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(phosphatase alkaline, ALP)活性;茜素红染色法检测钙化结节面积占比;双荧光素酶报告基因检测miR-98-5p与CKIP-1的靶向关系。结果:与对照组比较,牛膝甾酮组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著降低(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著升高(P<0.05);转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著升高(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著降低(P<0.05)。与牛膝甾酮组比较,牛膝甾酮联合转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著升高(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著降低(P<0.05)。与转染组比较,牛膝甾酮联合转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著降低(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,CKIP-1是miR-98-5p的一个靶基因,两者结合位点为CKIP-1的3′-UTR片段。结论:牛膝甾酮可促进SONFH大鼠BMSC自噬及成骨分化,其作用机制可能与抑制miR-98-5p从而下调CKIP-1表达有关。
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单位沧州市中心医院