牛膝甾酮抑制miR-98-5p促进激素性股骨头坏死大鼠BMSC自噬及成骨分化

作者：武瑞臣; 崔书伟; 李双庆

来源：中医学报, 2023, 38(06): 1139-1145.

DOI：10.16368/j.issn.1674-8999.2023.06.187

• 牛膝甾酮
• miR-98-5p
• 激素性股骨头坏死
• 骨髓间充质干细胞
• 成骨分化
• CKIP-1
• 大鼠

目的：观察牛膝甾酮调控miRNA-98-5p对激素性股骨头坏死(steroid induced osteonecrosis of the femoral head, SONFH)大鼠骨髓间充质干细胞(bone manrrow mesenchymal stemcells, BMSC)自噬及成骨分化的影响，并探讨相关机制。方法：10只SD大鼠建立SONFH模型，提取股骨、胫骨骨髓BMSC进行培养。将miR-98-5p过表达质粒miR-98-5p mimics转染至BMSC后分为转染组、牛膝甾酮联合转染组(10 mg·L-1),另取第3代BMSC分为对照组、牛膝甾酮组(10 mg·L-1)。qRT-PCR检测细胞miR-98-5p相对表达量；Western blot法检测细胞Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2 interaction protein 1,CKIP-1)蛋白表达量；对-硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(phosphatase alkaline, ALP)活性；茜素红染色法检测钙化结节面积占比；双荧光素酶报告基因检测miR-98-5p与CKIP-1的靶向关系。结果：与对照组比较，牛膝甾酮组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著降低(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著升高(P<0.05);转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著升高(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著降低(P<0.05)。与牛膝甾酮组比较，牛膝甾酮联合转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著升高(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著降低(P<0.05)。与转染组比较，牛膝甾酮联合转染组miR-98-5p表达量、CKIP-1蛋白表达量显著降低(P<0.05),Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达量、ALP活性、钙化结节面积占比显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示，CKIP-1是miR-98-5p的一个靶基因，两者结合位点为CKIP-1的3′-UTR片段。结论：牛膝甾酮可促进SONFH大鼠BMSC自噬及成骨分化，其作用机制可能与抑制miR-98-5p从而下调CKIP-1表达有关。

• 单位
  沧州市中心医院