卡介苗活性快速检测方法的建立及验证

作者：黄岳; 吴宇杰; 朱克骏; 江秋虹; **; 卢荣江; 韦芬; 陶立峰; 蒲江^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(04): 464-474.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003580

• 卡介苗
• 活性
• 生物荧光法
• ATP含量
• 活菌数

目的 建立卡介苗(Bacille Calmette-Guérin vaccine,BCG)活性的快速测定方法，并进行初步验证。方法 将ATP标准品稀释为6.25×10-10～2×10-8 mol/L，采用生物荧光法进行检测，获得相对荧光强度(relative light unit,RLU)，建立ATP浓度与RLU的标准曲线。分别通过离心法、本底法和ATP酶法提取9批低剂量(0.25、0.375、0.5 mg/mL)和6批高剂量(60 mg/mL)BCG的ATP，采用生物荧光法检测ATP含量，并评价其与活菌数(活菌计数法检测)的相关性。验证该方法的重复性和中间精密性。结果 ATP浓度在6.25×10-10～2×10-8mol/L范围内，与RLU呈良好线性关系，回归方程为y=1 680.4 x-574.46,R2=0.998 7。离心法提取高剂量及低剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数无显著相关性(P> 0.05)；本底法和ATP酶法提取高剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数具有显著相关性(P <0.05)，两种方法提取低剂量BCG的ATP的含量与相应活菌数无显著相关性(P> 0.05)。重复性和中间精密性验证的RSD均<8%。结论 建立的高浓度BCG活性的快速检测方法具有良好的重复性和中间精密性。

• 单位
  安徽智飞龙科马生物制药有限公司