转录因子KLF4参与肝细胞癌干性调控的机制研究

作者：廖玉婷; 文英娟; 徐志勇; 郑积华^*

来源：临床肿瘤学杂志, 2021, 26(09): 776-784.

• 肝细胞癌
• 细胞干性
• 转录因子
• 细胞增殖
• 细胞成球

目的探讨Krüppel样因子4(KLF4)对肝癌细胞自我更新能力的影响及其对肝癌细胞干性调控的潜在机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞MHCC-97L、Hep3B、PLC/PRF/5、HepG2及Huh7中KLF4 mRNA的表达水平。采用慢病毒感染法将搭载靶向KLF4的短发夹RNA的pLKO.1-puro质粒(pLKO.1-puro-shKLF4)导入到肝癌细胞PLC/PRF/5和Huh7中,同样的方法将过表达质粒pLenti-CMV-blast-KLF4转入肝癌细胞Hep3B和HepG2中,同时分别设置无义干扰片段和相应空白载体作为阴性对照组。采用qRT-PCR检验KLF4稳定沉默以及过表达效果后,分别通过细胞计数记录肝癌细胞增殖能力和成球能力的变化情况,同时通过qRT-PCR检测肝癌细胞中干性调控相关分子标志物表达水平的变化,进一步通过流式细胞术分选CD24+侧群肝癌细胞并检测其KLF4的表达。结果肝癌细胞PLC/PRF/5和Huh7中KLF4高表达,Hep3B和HepG2细胞则低表达KLF4。稳定沉默KLF4后,肝癌细胞PLC/PRF/5和Huh7的成球能力明显减弱,而稳定过表达KLF4后,肝癌细胞Hep3B和HepG2的成球能力明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,细胞干性调控分子CD24的表达在稳定沉默KLF4的肝癌细胞中下调,而在稳定过表达KLF4的肝癌细胞中上调。与CD24-肝癌细胞相比,CD24+肝癌细胞中KLF4的表达量显著上调。另外,过表达CD24能逆转沉默KLF4对MHCC-97L肝癌细胞成球能力的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KLF4能促进肝癌细胞的自我更新能力,在细胞干性的维持中呈现正向调控的功能。同时,CD24是KLF4基因下游的靶标分子,KLF4可能是通过促进下游靶基因CD24的表达来发挥其对肝癌细胞干性的促进作用。