ALOX15B-JNK在热应激诱导支持细胞氧化应激和凋亡中的作用

作者：薛鸿雁; 杨孟雨; 杨欢; 董丽君; 蔡霞清; 赵**; 王鲜忠^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5056-5065.

• 热应激
• 睾丸支持细胞
• JNK
• 细胞凋亡
• ALOX15B

旨在研究花生四烯酸脂氧合酶15B(arachidonate lipoxygenase type B, ALOX15B)是否参与了热应激条件下丙二醛(malondialdehyde, MDA)与活性氧(reactive oxygen species, ROS)的生成，进而调控睾丸支持细胞凋亡，以及JNK信号通路(jun amino terminal kinase, JNK)是否在这一过程中发挥了作用。本研究从20只3周龄的三元杂交仔猪的睾丸组织中分离出支持细胞，随机分为3组，每组3个重复，将体外培养的仔猪睾丸支持细胞在44℃条件下处理30 min作为热应激模型，分别转染ALOX15B的siRNA、添加ALOX15B抑制剂(黄芩素)或JNK抑制剂后，运用流式细胞术检测细胞的凋亡率，使用Western blotting检测磷酸化JNK、ALOX15B和p53的蛋白表达，利用ELISA检测8-HETE与15-HETE的含量，采用试剂盒检测MDA和ROS的水平。结果显示，与单独的热应激组相比，黄芩素和热应激联合处理减少了8-HETE和15-HETE的含量(P<0.01),降低了MDA和ROS的水平(P<0.01),抑制了热应激诱导的细胞凋亡率(P<0.01);在热应激条件下，黄芩素和ALOX15B的siRNA均抑制了热应激诱导的JNK的磷酸化(P<0.01);JNK抑制剂SP600125可抑制热应激条件下p53的表达水平(P<0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01)。与单独的热应激组相比，SP600125和热应激联合处理反馈抑制了ALOX15B的表达(P<0.01),减少了脂质过氧化物8-HETE(P<0.01)与15-HETE的含量(P<0.05),降低了MDA和ROS的水平(P<0.01)。这表明，在热应激条件下，ALOX15B使MDA和ROS的水平升高，诱导了支持细胞凋亡，JNK通过激活p53参与了ALOX15B调节的支持细胞凋亡；JNK可反馈调节ALOX15B、8-HETE、15-HETE、MDA和ROS的水平。

• 单位
  西南大学