从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区

作者：周吉航; 周世权; 王晔恺; 曾芳; 马利娜; 刘晓光

来源：解剖学报, 2012, (04): 479-483.

• 外周血
• 免疫球蛋白
• 轻链
• 可变区
• 反转录聚合酶链式反应
• 兔 Peripheral blood
• Immunoglobulin
• Light chain
• Variable region
• RT-PCR
• Rabbit

目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别...

• 单位
  中国科学院北京基因组研究所; 舟山医院