调控A20对NF-κB表达及Jurkat细胞的影响

作者：王哲; 肖仕珊; 丁倩; 王清; 周胜楠; 李哲; 朱红倩^*

来源：中国实验血液学杂志, 2020, 28(04): 1144-1151.

DOI：10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2020.04.010

• A20
• NF-κB
• T淋巴细胞白血病
• 耐药
• RNA干扰

目的:探讨在急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药Jurkat细胞株中,调控A20对NF-κB表达以及Jurkat细胞生物学特性的影响。方法:CCRF CEM和Jurkat细胞中分别加入100、10、1、0.1、0.01和0.001μmol/L地塞米松(DEX),培养24、48和72 h,应用CCK-8检测细胞增殖抑制的变化。构建A20质粒,设计并合成A20-siRNA,分别通过脂质体转染Jurkat细胞,CCK-8检测不同浓度DEX处理组、不同浓度DEX联合A20质粒和A20-siRNA处理组的Jurkat细胞增殖率。应用RT-qPCR检测NF-κB的m RNA表达水平,Western bolt检测蛋白表达水平,采用流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡。结果:不同浓度地塞米松(DEX)对CCRF CEM细胞生长的抑制作用呈显著的时间依赖性(r=0.984,P<0.05)和浓度依赖性(r=0.966,P<0.05);CCRF CEM细胞在24 h时,IC50接近1μmol/L,Jurkat细胞在1μmol/L和10μmol/L开始出现较大差异。由于1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞增殖率无明显变化,故选取1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞为对照组。检测显示A20质粒转染联合不同浓度DEX处理组细胞增殖率较DEX组及A20-siRNA联合DEX组低(P<0.05)。A20质粒转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率较对照组明显增高(P<0.05);A20-siRNA转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),A20-siRNA组细胞的凋亡率与对照组无明显改变(P>0.05)。结论:Jurkat细胞对DEX耐药,A20过表达联合DEX可增加对DEX耐药细胞的敏感性,降低Jurkat细胞增殖率;下调Jurkat细胞中NF-κB的表达水平,促进Jurkat细胞的凋亡。

• 单位
  人民医院血液科