猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体制备

作者：王乾飞; 袁凤玲; 王世敏; 汪倩倩; 何威; 罗波; 周必英^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(03): 310-318.

DOI：10.13350/j.cjpb.230312

• 猪囊尾蚴
• 排泄分泌抗原
• 硫氧还蛋白过氧化物酶
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的 原核表达猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx),并纯化TPx蛋白及制备兔多克隆抗体。方法 通过全基因合成的方法PCR扩增TPx基因。将扩增的TPx基因克隆至原核表达质粒pET30a载体中，构建重组质粒pET30a-TPx并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞，通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，12%SDS-PAGE电泳分析蛋白表达情况。用Ni-IDA亲和层析柱进行纯化，Western blot鉴定TPx重组蛋白的纯化效果。用纯化的TPx重组蛋白免疫新西兰兔，制备TPx多克隆抗体，ELISA测定纯化抗体的效价。结果 成功构建重组质粒pET30a-TPx,经IPTG诱导表达，获得以可溶性形式高效表达的TPx重组蛋白，相对分子质量约为22.43×103,纯化后的带有His标签的TPx重组蛋白能被兔抗血清识别。用纯化的TPx重组蛋白免疫新西兰兔，获得TPx多克隆抗体，其ELISA效价为1∶1 126 400,抗体纯度为85%。结论 成功制备猪囊尾蚴排泄分泌抗原TPx重组蛋白，并获得了高纯度、高效价的兔多克隆抗体。

• 单位
  第一临床学院; 遵义医科大学