广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

作者：张前程; 文红梅^*; 刘娜; 袁琪; 刘睿; 崔小兵; 李松; 陈盛君

来源：南京中医药大学学报(自然科学版), 2020, 36(03): 408-413.

DOI：10.14148/j.issn.1672-0482.2020.0408

• 广地龙
• DNA
• 特异性引物
• 鉴别
• 混伪品

目的通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果 COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750 bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574 bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。

• 单位
  南京中医药大学; 江阴天江药业有限公司