RIPK4低表达影响骨肉瘤细胞增殖与丝裂原活化蛋白激酶信号通路的研究

作者：屈涛; 刘华; 杨成伟; 王世勇

来源：华南国防医学杂志, 2018, 32(03): 149-168.

DOI：10.13730/j.issn.1009-2595.2018.03.002

• 骨肉瘤MG-63
• 受体相互作用蛋白激酶4
• 丝裂原活化蛋白激酶通路

目的探讨受体相互作用蛋白激酶4(receptor interacting protein kinase 4,RIPK4)低表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路异常的相关性研究。方法脂质体转染法将RIPK4-siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞;四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测骨肉瘤MG-63细胞增殖情况;免疫荧光实验检测RIPK4-siRNA低表达对MAPK表达分布的影响;蛋白质印迹实验检测骨肉瘤MG-63细胞中RIPK4-siRNA对MAPK信号通路的影响。结果 MTT结果表明,和空白组比较,RIPK4-siRNA转染组48h时细胞生存率明显较低(P<0.05)。免疫荧光实验显示,RIPK4低表达后,RIPK4-siRNA转染组细胞中,MAPK主要分布在细胞核,且总体表达减少。蛋白质免疫印迹法结果显示,RIPK4-siRNA转染MG-63细胞后,RIPK4蛋白水平明显下调,同时,MAPK在细胞胞浆的表达减少,而在细胞胞核的表达分布增多。灰度值分析表明,和空白组比较,RIPK4-siRNA转染组MAPK下游的因子细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)、p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)、核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的灰度值明显降低(P<0.05)。结论在MG-63细胞中,RIPK4的低表达影响MAPK激酶的分布及表达,RIPK4的低表达对MG-63细胞增殖抑制可能和MAPK/ERK/p38/JNK/NF-κB信号通路异常有关。