塞内卡病毒和口蹄疫病毒二重实时荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

作者：谢彩华; 闫若潜; 班付国; 王东方; 赵雪丽; 赵兴绪^*; 闫志玲; 王翠; 刘影; 王淑娟; 马震原; 王华俊

来源：中国兽医学报, 2019, 39(12): 2298-2304.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.12.05

• 口蹄疫病毒
• 塞内卡病毒
• 二重实时荧光RT-PCR

为了建立一种快速、敏感、特异的能够鉴别诊断口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVV)二重实时荧光RT-PCR方法,根据FMDV及SVV的保守基因序列,设计了2套特异性引物和不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV和SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对二重实时荧光RT-PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对98份疑似FMDV和SVV感染的临床样品进行了检测。结果显示,成功建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,模板在101～107拷贝/μL有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV和pGEM-T/SVV重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线,方法特异性较好;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自98份疑似FMDV和SVV感染样品中检出9份FMDV阳性,10份SVV阳性,2份FMDV和SVV双阳性,并且和克隆测序结果一致。本研究建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,可用于FMDV和SVV的快速鉴别检测,为FMDV和SVV的鉴别诊断提供特异、敏感和高通量的方法。

• 单位
  河南省动物疫病预防控制中心; 甘肃农业大学