增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因共表达载体的构建和表达

作者：郑敏明; 周希瑗; 王丽萍

来源：第三军医大学学报, 2010, (15): 1625-1627.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2010.15.034

• Rb94基因
• 真核表达载体
• 人视网膜母细胞瘤细胞 Rb94 gene
• eukaryotic expression vector
• human retinoblastoma cells

目的构建增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因的真核共表达载体并鉴定其在真核细胞中的表达。方法用PCR技术对cDNA-Rb质粒中的目的基因片段进行扩增,使用BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切,切胶回收DNA片段。将其连接入pEGFP-C1,构建pEGFP-C1/Rb94真核表达载体并再进行酶切鉴定。将重组质粒用脂质体转染法转染至人视网膜母细胞瘤细胞(HXO-Rb44)中,荧光显微镜下观察EGFP在细胞内的表达,Western blot检测Rb蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果重组克隆载体内的目的片段序列与Rb94基因序列完全一致。pEGFP-C1/Rb94酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微...

• 单位
  重庆医科大学附属第二医院