突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定

作者：罗森; 王琴; 房华丽; 王德慧; 李崭; 李涛; 王慧

来源：军事医学, 2013, 37(04): 250-253.

DOI：10.7644/j.issn.1674-9960.2013.04.003

• 囊泡相关膜蛋白质2
• 金属内肽酶
• 底物
• 原核表达 vesicle-associated membrane protein 2
• metalloptidase
• substrate
• prokaryotic expression

目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL2...

• 单位
  安徽医科大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院