利用分子方法鉴别白花蛇舌草及其伪品伞房花耳草

作者：莫静; 王文斌; 程华春; 李小芳; 刘红^*; 汪波^*

来源：药物分析杂志, 2023, 43(04): 676-684.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2023.04.17

• 多重连接探针扩增技术
• 白花蛇舌草
• 伞房花耳草
• 实时荧光定量PCR
• 熔解曲线
• 鉴别
• 掺假

目的:建立一种鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的分子方法，确保临床用药安全。方法:根据白花蛇舌草和伞房花耳草内转录间隔区2(ITS2)序列的差异设计特异探针，采用多重连接探针扩增(MLPA)技术和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)技术，建立了一种能够鉴别白花蛇舌草、伞房花耳草的多重连接探针扩增-实时荧光定量PCR(MLPA-qPCR)方法。结果:对扩增产物进行熔解曲线分析，结果显示，所设计的MLPA探针具有良好的特异性，探针之间不存在交叉反应，白花蛇舌草探针的特异性熔解曲线Tm值为(81.8±0.2)℃,伞房花耳草探针的熔解曲线Tm值为(84.0±0.2)℃;灵敏度分析结果表明，该方法检出白花蛇舌草和伞房花耳草的最低模板量均为0.1 ng;掺伪检测试验结果表明，当白花蛇舌草探针与伞房花耳草探针比例为1.0∶0.6时，白花蛇舌草中掺杂1%的伞房花耳草仍可被有效检出。对收集的39份样品进行检测，成功鉴别白花蛇舌草25份、伞房花耳草12份、白花蛇舌草与伞房花耳草混合样品2份。结论:本研究所建立的MLPA-qPCR方法特异性强，灵敏度高，可作为鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的特异性鉴别方法。

• 单位
  湖北省药品监督检验研究院; 湖北中医药大学; 湖北大学