葛根素单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法建立

作者：魏文斌; 岳世彦; 周荣荣; 南铁贵^*; 陈敏^*; 袁媛

来源：中国中药杂志, 2022, 47(01): 48-53.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20211025.101

• 葛根素
• 单克隆抗体
• 中药
• 酶联免疫分析法

采用过碘酸盐氧化法,将葛根素半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,得到免疫抗原葛根素-BSA和包被抗原葛根素-OVA。葛根素-BSA常规免疫程序免疫BALB/c小鼠,3次免疫后检测小鼠血清的效价和特异性。加强免疫后取小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,采用单克隆抗体筛选技术,筛选得到抗葛根素单克隆抗体杂交瘤细胞株24株。制备腹水并纯化后,其中抗葛根素单克隆抗体M1与4′-甲氧基葛根素、大豆苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷元、葛根素芹菜糖苷、3′-甲氧基葛根素和3′-羟基葛根素的交叉反应率分别为239.84%、112.18%、67.89%、58.28%、22.37%、0.40%、0.20%,与黄芩素和黄芩苷等其他化合物的交叉反应率均<0.10%。基于抗葛根素单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)的IC50为44.80 ng·mL-1,检测范围为8.20～292.30 ng·mL-1,加样回收率为91.95%～98.20%,变异系数为0.70%～2.60%。利用所建立的icELISA测定了6批葛根类药材中葛根素的含量,并用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS)进行验证,两方法的相关性为0.999 0,表明所建立的icELISA可以用于葛根和粉葛中葛根素含量的快速检测。

• 单位
  道地药材国家重点实验室; 中国中医科学院