酸性神经酰胺酶shRNA表达载体的构建及鉴定

作者：邓文敏; 刘玉和; 肖水芳

来源：中国耳鼻咽喉头颈外科, 2013, 20(05): 235-238.

DOI：10.16066/j.1672-7002.2013.05.003

• RNA,小分子干扰
• 肿瘤,鳞状细胞
• 酸性神经酰胺酶

目的构建特异性抑制人酸性神经酰胺酶(acid ceramidase,AC)基因表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体,筛选出基因沉默效果最明显的shRNA,以明了shRNA对头颈肿瘤细胞AC表达的影响。方法针对人AC基因设计并构建4个shRNA质粒,转染人肾上皮细胞系293T细胞,通过实时定量PCR及Western blot的方法筛选出沉默效果最明显的shRNA序列,以该序列构建慢病毒载体感染人鼻咽癌CNE-2Z细胞及人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,验证其对这些细胞的基因沉默效果。结果 4个shRNA质粒转染293T细胞后AC mRNA及蛋白表达均降低,其中sh1340的抑制效果最明显。sh1340慢病毒感染肿瘤细胞后AC基因沉默的效果分别为CNE-2Z(79.3±0.5)%和Hep-2(80.7±5.1)%。结论成功构建特异性抑制AC表达的shRNA表达载体,为进一步研究AC的功能及头颈肿瘤的基因治疗奠定基础。

• 单位
  北京大学第一医院