用于耐药肿瘤细胞代谢组学的细胞内核苷类组分离子对色谱分析法

作者：赵筱萍; 朱狄峰; 程翼宇

来源：药物分析杂志, 2005, 25(09): 1015-1018.

• 代谢组学
• K562/A
• 核苷
• 核苷酸
• RP-HPLC

目的:建立测定 K562及 K562/A 细胞内核苷类代谢物含量的高效液相色谱法,用于两者代谢组学研究。方法:采用1.2mol·L~(-1)HClO\-4沉淀蛋白,用苯硼酸柱进行固相萃取富集样品中的核苷酸。色谱柱为汉邦 C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相由两种缓冲液组成,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min~(-1)。A 相缓冲液含10 mmol·L~(-1)四丁基氢氧化铵,10 mmol·L~(-1)KH_2PO_4及0.25%甲醇,pH7.0;B相缓冲液含5.6 mmol·L~(-1)四丁基氢氧化铵,50 mmol·L~(-1)KH_2PO_4及30%甲醇,pH7.0。柱温25℃,检测波长260nm。结果:各种核苷类代谢物分离良好,内源性物质无干扰,K562及 K562/A 细胞内核苷类代谢物平均回收率分别为88.3%～109.2%、84.5%～115.6%。结论:该法简便及重现性好,可同时测定肿瘤细胞中核苷、单核苷酸、二核苷酸及三核苷酸含量。分析结果表明,K562与 K562/A 细胞核苷类代谢物组存在明显差异。

• 单位
  浙江大学