人与鼠源内皮抑制素不同标签重组蛋白的表达纯化及活性分析

作者：杨益金; 陆俊佳; 覃霞; 畅荣妮; 赖青鸟; 华荣; 方玲; 吴华裕; 侯伟; 吴飞翔; 谢彤; 袁志刚; 舒伟

来源：过程工程学报, 2014, 14(04): 649-654.

• 内皮抑素
• DNA序列
• 重组蛋白
• 纯化
• 鸡胚绒毛尿囊膜试验
• 诱导表达

根据文献报道和NCBI数据库确定人源内皮抑制素(HE)和鼠源内皮抑制素(ME)DNA序列,以DNA合成法分别获得长度为554 bp的人源内和长度为565 bp的鼠源内皮抑素基因;分别构建携带谷胱甘肽巯基转移酶(GST)表达标签的原核表达质粒pGEX-4T1-HE和携带硫氧还蛋白A(TrxA)表达标签的原核表达质粒pET-32a-ME,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得不同表达标签的HE、ME重组蛋白.最后通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验验证重组蛋白的抗血管生成活性.结果表明,构建了人与鼠源内皮抑制素基因不同标签表达载体,在大肠杆菌中成功诱导表达.获得具有活性的人与鼠源ES重组蛋白.纯化复性后的重组蛋白能明显抑制新生血管的生长.GST和TrxA标签对增进重组ES可溶表达没有显著差异,两组标签的重组蛋白都主要存在于包涵体内.

• 单位
  广西壮族自治区肿瘤医院; 广西医科大学