DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

作者：耿建慧; 陈建; 张二龙; 阳一栋; 陈德伟; 吴刚; 王羽; 赵文琦; 高钰琪^*

来源：陆军军医大学学报, 2022, 44(08): 731-739.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202111203

• DNase 2α
• 线粒体DNA
• 大鼠肺动脉平滑肌细胞
• 缺氧
• 增殖

目的 探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法 培养原代RPASMCs,采用3%O_2缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence, siRNA)敲低Dnase2a的表达，采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达。采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖，使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达。采用MTS法检测各组细胞增殖能力，实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA表达，Western blot法检测DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达。结果 缺氧可诱导RPASMCs增殖，并上调DNase 2α的表达(P<0.05)。siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P<0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P<0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P<0.05)。过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P<0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P<0.05)。外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖，而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P<0.05)。过表达Hif1a或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达，并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P<0.05)。结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖，缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军陆军军医大学