核磷蛋白1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系的建立与纯化

作者：罗陈烁; 赵嫚; 雷婷; 张曼^*

来源：标记免疫分析与临床, 2019, 26(09): 1560-1564.

• NPM1
• 耐药膀胱癌
• 顺铂
• 细胞感染
• 细胞模型

目的旨在建立核磷蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。方法采用慢病毒感染的方式,对耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP的NPM1基因进行敲除,并采用RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)和Western blotting法在基因水平和蛋白水平对NPM1的敲除效果进行验证,并通过荧光显微镜验证荧光效率。采用有限稀释法对感染后的细胞进行筛选纯化,通过单克隆增殖的方法对纯化后的细胞增殖培养,建立具有NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。结果通过基因和蛋白水平比较筛选出能够有效敲除NPM1的基因片段,并通过单克隆筛选获得了NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系。筛选后细胞系荧光效率近100%,且对NPM1有明显敲除效率。结论NPM1稳定敲除的耐顺铂膀胱癌细胞系T24/DDP具有稳定的NPM1基因敲除效果,可以作为研究膀胱癌细胞耐药的良好实验模型。

• 单位
  北京大学; 首都医科大学附属北京世纪坛医院