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摘要
目的 依托超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）、中医药整合药理学研究平台（TCMIP）及细胞实验，探讨生血补髓汤主要活性成分对破骨细胞分化的影响及其干预股骨头坏死的潜在作用机制。方法 采用UPLC-Q-TOF-MS分析生血补髓汤中的多种成分，将鉴定出的化学成分用TCMIP进行药物靶点预测，同时获取股骨头坏死的疾病靶点，进行“疾病-方剂”关联分析，获得关键治疗靶点，进行蛋白相互作用（PPI）网络、GO生物功能和KEGG信号通路富集分析。体外培养RAW264.7细胞，RANKL诱导细胞破骨分化，并用生血补髓汤单体复方进行干预。采用CCK-8法检测不同浓度生血补髓汤单体复方培养RAW264.7细胞活力，选择最大无毒浓度单体复方进行干预。采用TRAP染色法鉴定细胞破骨分化情况，DCFH-DA荧光探针分析细胞中活性氧（ROS）水平，RT-qPCR检测细胞IL6、PTGS2、TNFα和RELA基因表达。结果 鉴定出生血补髓汤46个活性成分，包括阿魏酸、绿原酸、芍药苷、梓醇、槲皮素、山柰酚等；预测到药物潜在靶点732个，股骨头坏死潜在靶点1 386个，治疗靶点48个。GO生物过程主要涉及炎症反应及氧化应激等，KEGG通路主要涉及TNF信号通路、IL-17信号通路、PI3K信号通路、HIF-1信号通路等。实验结果表明，生血补髓汤单体复方可显著减少RANKL诱导RAW264.7细胞破骨分化中成熟破骨细胞数量、细胞浆内ROS含量，下调IL6、PTGS2、TNFα、RELA mRNA表达。结论 生血补髓汤有效成分可以通过抑制ROS和炎症因子调控破骨分化，从而抑制骨吸收、抑制炎症反应，进而治疗股骨头坏死。
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