TSP-1活化TGF-β1在高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

作者：孔刚; 吕学爱^*; 王丽雅; 胡迎春

来源：宁夏医科大学学报, 2021, 43(12): 1205-1210.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2021.12.001

• 凝血酶敏感蛋白-1
• 转化生长因子-β1
• 高糖
• 肾小管上皮细胞
• 凋亡

目的探究干扰凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法将培养好的人肾小管上皮细胞HK-2细胞分为4组:对照组用5.6 mmol·L-1葡萄糖培养液培养,高糖组用30 mmol·L-1葡萄糖培养液培养,阴性对照组和TSP-1 shRNA组分别感染对照慢病毒和TSP-1 shRNA慢病毒,建立稳定感染的HK-2细胞系后均给予30 mmol·L-1葡萄糖培养液培养。0、12、24、36、48、60和72 h,CCK-8检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中TSP-1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、E-钙黏素(E-cadherin)、锌指转录因子Snail的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中TSP-1、TGF-β1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、Caspase 9、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)蛋白水平。结果与对照组相比,高糖组、阴性对照组12、24、36、48、60和72 h的细胞增殖OD450值均降低(P均<0.05);分别与高糖组、阴性对照组相比,TSP-1 shRNA组12、24、36、48、60、72 h的细胞增殖OD450值均升高(P均<0.05)。培养48 h后,与对照组相比,高糖组、阴性对照组细胞凋亡率,细胞中TSP-1、TGF-β1 mRNA和蛋白、Fibronectin、Snail mRNA水平、Caspase 3、Caspase 9、BAX蛋白水平均升高(P均<0.05);E-cadherin mRNA水平、BCL2蛋白水平均降低(P均<0.05)。分别与高糖组、阴性对照组相比,TSP-1 shRNA组细胞凋亡率,细胞中TSP-1、TGF-β1 mRNA和蛋白、Fibronectin、Snail mRNA水平,Caspase 3、Caspase 9、BAX蛋白水平均降低(P均<0.05);E-cadherin mRNA水平、BCL2蛋白水平均升高(P均<0.05)。结论干扰TSP-1可影响高糖诱导的HK-2细胞的TGF-β1表达,降低高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡率,实现对细胞的保护。

• 单位
  泰安市中心医院