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摘要
为探索双香豆素（dicoumarin, DIC）抑制斜纹夜蛾Spodoptera litura卵巢细胞SL-221增殖及作用机制，首先，采用CCK-8法测定双香豆素等21个酚类化合物对SL-221细胞的毒性；其次，通过倒置显微镜观察4μg/mL双香豆素处理细胞48 h后其形态变化，并结合流式细胞术研究双香豆素对SL-221的细胞周期、线粒体膜电位及凋亡的影响；最后，通过实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）探索磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）/雷帕霉素靶蛋白（target of rapamycin, TOR）营养信号通路的下游关键基因的表达变化。结果表明，21个酚类化合物中双香豆素对SL-221细胞的增殖抑制活性最显著，且呈现明显的浓度依赖性，其48 h的IC50为0.85μg/mL,对细胞的增殖抑制活性是阳性对照印楝素(IC50为7.20μg/mL)的8.47倍。4μg/mL双香豆素处理SL-221细胞48 h后，显微镜下可见细胞肿胀、膜破裂及大量凋亡小体；流式细胞术分析发现，双香豆素处理48 h, SL-221的细胞周期被阻滞在G2/M期，同时线粒体膜电位相比0 h下降99.62%,细胞凋亡，且凋亡率与处理时间呈正相关。RT-qPCR检测发现，双香豆素可显著下调营养信号通路（PI3K/TOR）上的关键基因SL-PI3K和SL-TOR的表达，同时诱导自噬标志基因SL-Atg8及凋亡指示基因SL-Cytochrome C和SL-P53上调表达，且抑制抗凋亡基因SL-Bcl-2的表达。综上，双香豆素对斜纹夜蛾卵巢细胞具有优异的抑制增殖活性，同时阻断细胞周期并通过抑制营养信号途径（PI3K/TOR）诱导细胞程序性死亡，该化合物具备开发成为新型植物源杀虫剂的潜力。
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