牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

作者：马磊; 朱远茂; 蔡红; 王姝; 史鸿飞; 吕闯; 董秀梅; 高欲燃; 薛飞

来源：中国生物工程杂志, 2012, (12): 20-24.

DOI：10.13523/j.cb.20121204

• 牛呼吸道合胞体病毒
• 核蛋白
• 单克隆抗体
• 特异性 Bovine respiratory syncytial virus Nucleoprotein Monoclonal antibody Specificity

利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室