斯氏艾美耳球虫热休克蛋白70基因的克隆及表达分析

作者：景瑾; 张帅; 仇保丰; 董蓉莲; 蒋荧梅; 朱顺星; 田颖超; 刘春; 吴刘成; 宋鸿雁; 邵义祥

来源：黑龙江畜牧兽医, 2017, (07): 11-16.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.0571

• 斯氏艾美耳球虫
• 热休克蛋白70(HSP70)
• cDNA末端快速扩增法
• 克隆
• 原核表达
• 重组蛋白

为了获得斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的热休克蛋白70(HSP70)的全基因序列,并诱导表达重组HSP70蛋白,试验根据免疫蛋白组学研究的质谱结果获得的部分氨基酸序列和已发布近源物种HSP70蛋白序列设计引物,通过c DNA末端快速扩增法(RACE)获得E.stiedai HSP70的全基因序列,将其连入原核表达载体p ET-28a(+),转化Competent Rosetta2(DE3)p Lys S,通过IPTG诱导表达重组HSP70蛋白,并进行Western-blot分析。结果表明:HSP70序列全长为2 727 bp,最大ORF为2 010 bp。HSP70在诱导后37℃培养4 h条件下有表达,但全部为不溶性表达;在诱导后20℃过夜培养条件下无表达。说明试验成功获得E.stiedai HSP70的全基因序列以及重组HSP70蛋白。

• 单位
  江苏省疾病预防控制中心; 南通大学; 南通大学杏林学院