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摘要
从免疫炎症和肠道菌群角度探究葶苈大枣泻肺汤对哮喘的干预作用机制,为指导临床合理用药提供理论依据。通过腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏液和雾化激发构建哮喘大鼠模型,分为正常组(control,CON)、模型组(model, M)、地塞米松组(dexamethasone, DEX, 0.075 mg·kg-1)和葶苈大枣泻肺汤组(Tingli Dazao Xiefei Decoction, TLDZ, 3.5 g·kg-1)。首先通过咳嗽、喘息、酚红排泌、苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E)、马松染色(Masson)和过碘酸雪夫氏染色(periodic acid Schiff, PAS)观察葶苈大枣泻肺汤对大鼠哮喘症状、肺脏和气管病理变化的影响; ELISA检测大鼠血清中转化生长因子β1 (transforming growth factor β1, TGF-β1)、白细胞介素(interleukin, IL) 6和IL-10水平及肺泡灌洗液中γ干扰素(interferon γ, IFN-γ)、免疫球蛋白E (immunoglobulin E,IgE)、IL-4、IL-17A和肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α)水平; qRT-PCR检测肺组织中IL-5、IL-13和IL-33的mRNA水平;然后采用流式细胞术结合免疫组化检测脾脏中巨噬细胞和中性粒细胞水平和外周血中自然杀伤细胞(natural killer cell, NK)、辅助性T细胞(helper T cell, Thc)、树突状细胞(dendritic cell, DC)、调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和辅助性T细胞17 (T helper cell 17, Th17)水平;接着通过16S rDNA高通量测序分析哮喘大鼠肠道菌群。病理学和炎症因子结果显示,葶苈大枣泻肺汤可有效减轻大鼠哮喘症状,改善肺部组织病理变化,减少杯状细胞和胶原纤维产生,抑制哮喘大鼠炎症反应;免疫细胞结果显示,葶苈大枣泻肺汤可有效增加哮喘大鼠NK、Thc、DC和Treg细胞水平并降低巨噬细胞、中性粒细胞和Th17细胞水平;肠道菌群结果显示,葶苈大枣泻肺汤可增加哮喘大鼠乳酸杆菌、瘤胃球菌、克里斯滕森菌、双歧杆菌和真杆菌属水平,降低厚壁菌、Mucispirillum、Romboutsia和脱硫弧菌属水平。因此,推测葶苈大枣泻肺汤可通过调节哮喘大鼠体内免疫炎症反应和肠道菌群从而改善大鼠哮喘症状。本文中所有动物实验都获得河南中医药大学伦理学委员会批准。
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