低氧条件下小分子化合物VCR组合诱导大鼠成纤维细胞重编程神经前体细胞的实验研究

作者：王圆圆; 孙婷婷; 杨盼; 徐佳佳; 梁宇; 吴凡; 马彩云; 王春景; 刘长青; 郭俣^*

来源：四川大学学报（医学版）, 2022, 53(05): 790-797.

• 小分子化合物组合
• 低氧
• 细胞重编程
• 神经前体细胞

目的 探讨大鼠胚胎成纤维细胞(rat embryoic fibroblasts, REFs)在低氧条件下(5%O2)重编程为化学诱导大鼠神经前体细胞(chemically induced rat neural progenitor cells, ciRNPCs)的方法体系。方法 分两阶段将REFs重编程为ciRNPCs，第一阶段是化学诱导产生中间态细胞，REFs在低氧条件下采用含有小分子化合物的组合VCR(valproic acid、CHIR99021和RepSox)和10 000 U/mL白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)的KSR培养基培养15 d，观察到致密细胞集落即中间态细胞形成；第二阶段是特异性诱导ciRNPCs，用胰酶消化中间态细胞，接种至低黏附板，在常氧条件下可形成ciRNPCs神经球。CM-DiI标记后，定向移植至大鼠黑质-纹状体，通过免疫荧光检测ciRNPCs在宿主脑内存活、迁移及分化状况。结果 低氧诱导5～10 d时已观察到明显细胞聚集趋势，15 d时已形成聚集紧密的克隆，1×105个细胞中大约产生30个克隆，同时大部分细胞克隆碱性磷酸酶染色呈阳性，消化重铺后2 d即可观察到有神经胚球形成，并可表达神经前体细胞(neural progenitor cells, NPCs)表面特征性抗原(Nestin、Sox2和Pax6)，而且具有向神经胶质细胞和神经元分化的能力，分别表达GFAP和Tuj1特异性标志物。移植8周后，大鼠脑内可分化为GFAP+和Tuj1+细胞。结论 小分子化合物VCR组合在低氧条件下可直接诱导REFs重编程为ciRNPCs，并具备体内与体外诱导分化为神经胶质细胞和神经元的潜能，为ciRNPCs移植治疗神经损伤疾病奠定基础。

• 单位
  生命科学学院; 蚌埠医学院