亚甲基蓝多克隆抗体的制备与鉴定

作者：黄宣运; 杨光昕; 史永富; 黄冬梅; 叶洪丽; 蔡友琼^*

来源：海洋渔业, 2021, 43(01): 104-111.

DOI：10.13233/j.cnki.mar.fish.2021.01.011

• 亚甲基蓝
• 半抗原
• 偶联物
• 多克隆抗体

为建立检测水产品中亚甲基蓝及其代谢物残留的酶联免疫吸附检测方法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),以亚甲基蓝代谢物天青C(azure C)为亚甲基蓝的半抗原,采用戊二醛法,将azure C上的氨基与蛋白上的羧基进行偶联,制备免疫原azure C-BSA和包被原azure C-OVA。利用紫外扫描(UV)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对免疫原和包被原进行鉴定。以azure C-BSA为免疫原,按0.2 mg·只-1的剂量免疫BALB/c小鼠,对获得的多克隆抗体的效价、灵敏度和特异性进行测定。实验结果表明:制备的人工抗原azure C-BSA和azure C-OVA偶联成功,偶联比约为31∶1和52∶1。经过ELISA测定,多克隆抗体效价均在16 000以上,其中2号小鼠抗体效价最高,半数抑制浓度(IC50)为43.9 ng·mL-1,该抗体与亚甲基蓝代谢物天青A、天青B和天青C存在交叉反应,交叉反应率分别为127.6%、84.7%和138.1%,与其他常见染料不存在交叉反应,说明该抗体特异性良好。实验成功合成亚甲基蓝人工抗原并获得免疫学特性良好的鼠源多抗血清,为后期单克隆抗体的制备及开发免疫学快速检测方法奠定了基础。

• 单位
  中国水产科学研究院东海水产研究所; 上海海洋大学