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摘要
目的观察不同血清浓度对大鼠软骨细胞体外培养的形态、增殖和基因表达的调控作用。方法取出生24h SD大鼠关节处软骨,0. 1%浓度的Ⅱ型胶原酶多次消化后获得软骨细胞。软骨细胞培养于含5%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS),10%FBS和20%FBS的DMEM低糖培养基中,分别为5FBS组,10FBS组和20FBS组。24h后镜下观察细胞形态变化,CCK8方法检测24、48和72h软骨细胞增殖。Western blot法检测软骨指标Ⅱ型胶原A1(COL2A1)和MMP13(matrix metalloproteinases13)表达,定量PCR检测软骨特异性基因Sox9、A-can、ADAMTS5、MMP9和MMP3的表达及代谢相关基因Nme2和Pn P表达。结果5FBS组的软骨细胞呈由鹅卵石样排列,10FBS组和20FBS组细胞呈现长梭形改变,且血清浓度越大,形态改变越明显。和5FBS组比较,10FBS组和20FBS组细胞增殖明显,呈血清浓度依赖性增加。10FBS组和20FBS组的MMP13表达显著上调,Ⅱ型胶原表达显著下调。PCR结果表明,和5FSB组比较,10FBS组和20FBS组的A-can和Sox9表达下降,MMP9、MMP3和ADAMTS5表达上调,且基因表达变化和血清浓度改变呈正相关。同时随着血清浓度增加,Nme2和Pn P表达显著上调。结论血清浓度的增高促进软骨细胞代谢,引起软骨细胞退变。
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