2型鹅星状病毒VP27蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：向勇; 李林林; 张俊勤; 董嘉文; 黄允真; 翟颀; 杨希; 孙敏华

来源：中国家禽, 2023, 1-7.

• 2型鹅星状病毒
• VP27
• 多克隆抗体

为进一步研究2型鹅星状病毒（GAstV-2）及其纤突结构蛋白VP27，通过基因密码子优化合成构建pCZN1-VP27原核表达质粒；利用大肠杆菌系统通过IPTG诱导表达VP27蛋白后进行纯化，以纯化的VP27蛋白免疫新西兰白兔，收获抗血清并纯化得到VP27多克隆抗体；分别通过间接ELISA和SDS-PAGE分析抗体的效价和纯度；将GAstV-1、GAstV-2病毒液接种LMH细胞，通过免疫印迹和免疫荧光试验对VP27多克隆抗体进行验证；将GAstV-2阳性或阴性的临床病料组织研磨液接种LMH细胞，利用VP27多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其临床应用效果。结果显示：纯化后的VP27多克隆抗体效价高达1∶3 280 500，纯度高于85%。免疫印迹试验结果显示，GAstV-2感染组在35 ku处出现特异性条带，GAstV-1感染组则未出现该条带；免疫荧光结果显示仅GAstV-2感染组可观察到特异性荧光；临床病料组织的免疫荧光试验结果显示，GAstV-2阳性的病料组织均可出现特异性荧光，GAstV-2阴性的病料组织未出现荧光。研究获得了可特异性识别GAstV-2的VP27多克隆抗体，为深入研究VP27蛋白在GAstV-2的感染和致病机制中的作用提供了生物材料，也为建立GAstV-2抗原免疫检测技术奠定了基础。