新型血友病B基因治疗的腺病毒-整合酶嵌合系统的构建及其体外表达鉴定

作者：张磊; 顾东生; 薛峰; 杜伟廷; 刘鹏霞; 周泽平; 卢士红; 杨仁池

来源：中国实验血液学杂志, 2010, 18(05): 1229-1234.

• 腺病毒载体
• 嵌合载体
• phiC31
• Cre
• 血友病B
• 位点特异性整合

本研究构建一种既可高效感染靶细胞又能实现安全定点整合入宿主基因组的腺病毒嵌合载体。通过一系列DNA操作构建腺病毒-整合酶嵌合系统,该系统包含两个腺病毒载体:一个携带转基因表达框,表达框内有hFⅨ,红色荧光蛋白编码序列以及attB(phiC31识别位点),表达框两侧各有1个loxP(Cre识别位点);另一个腺病毒载体携带Cre和phiC31基因。同时构建只表达Cre和只表达phiC31的载体作为对照载体。在体外分别用脂质体转染293A细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,用RT-PCR鉴定各个基因的表达。结果表明,该腺病毒-整合酶嵌合系统构建成功。体外分别用脂质体转染293A细胞后,可见绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白表达。RT-PCR鉴定表明,该系统能够成功表达各种目的蛋白。结论:成功构建了腺病毒-整合酶嵌合系统,为进一步研究其治疗作用提供良好基础。

• 单位
  实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院