H9和H6亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

作者：李丹; 李孟; 谢芝勋^*; 罗思思; 谢丽基; 张民秀; 黄娇玲; 范晴; 王盛; 谢志勤; 邓显文; 曾婷婷; 张艳芳

来源：贵州农业科学, 2020, 48(04): 87-91.

• 禽流感病毒
• H9亚型
• H6亚型
• M基因
• 三重RT-PCR

为H9与H6亚型禽流感病毒(AIV)的监测及其防控提供技术支撑,依据Genbank中H9和H6亚型AIV的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立并优化可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的三重RT-PCR检测方法,并对所建方法进行特异性、敏感性及临床样品检测验证。结果表明:三重RT-PCR反应的最佳体系为2×PCR Mix 12.5μL,H9与H6亚型AIV cDNA共2μL为模板,特异性引物M-F和M-R(20pmol/μL)加入量为0.6μL,特异性引物H9-F和H9-R(20pmol/μL)及H6-F和H6-R(20pmol/μL)的加入量分别为0.7μL和1μL,用RNA-free水补足至终体积为25μL,退火温度53℃。该方法可在一个反应管内同时鉴别检测H9与H6亚型AIV,特异性强,敏感性高,可推广应用。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所