共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性

作者：李炯; 刘艳红; 刘湘涛; 尚佑军; 刘俊林; 安芳兰; 殷宏

来源：微生物学报, 2008, (11): 1520-1525.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2008.11.023

• 逆转录病毒载体
• 口蹄疫病毒
• 衣壳蛋白
• MDBK细胞 retroviral vector
• FMDV
• capsid protein
• MDBK cell

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶...

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部