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摘要
RING(really interesting new gene)型E3泛素连接酶在植物逆境胁迫和生长发育过程中起关键作用。本研究利用RACE技术从柠条锦鸡儿中克隆得到一个RING型E3泛素连接酶基因CkRNF185 (Caragana korshinskii RING-finger 185),其cDNA序列全长1112 bp,包含了696 bp的开放阅读框,编码232个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现, CkRNF185基因的表达受NaCl和脱水处理的诱导。同时构建pCanG-CkRNF185过表达载体并转化野生型拟南芥,得到转基因拟南芥过表达纯合体株系。通过对转基因拟南芥的研究,发现在甘露醇处理条件下转CkRNF185植物植株变小且叶片提前变黄坏死,叶绿素和脯氨酸含量皆降低。利用体外泛素化实验对CkRNF185进行检测发现该蛋白具有E3泛素连接酶活性。这些实验结果表明过表达E3泛素连接酶编码基因CkRNF185降低了拟南芥对渗透胁迫的耐受性。
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