尼罗罗非鱼p38MAPK基因克隆与表达分析

作者：马银花; 邹芝英; 祝璟琳; 喻杰; 肖炜; 李大宇; 杨弘^*; **各; 陈炳霖

来源：淡水渔业, 2020, 50(03): 42-49.

DOI：10.13721/j.cnki.dsyy.2020.03.006

• ntp38MAPK
• 尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)
• 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)
• 基因克隆
• 组织表达

为了探究p38MAPK与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫功能的相关性,本实验运用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得尼罗罗非鱼埃及品系ntp38MAPK的cDNA全长序列,结果显示,该序列全长1 789 bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长1 086 bp,5′非编码区(Untranslated Region,UTR)长342 bp,3′UTR为361 bp。ORF编码361个氨基酸,预测分子量为41.598 kD,理论等电点为5.10。序列含有p38家族典型保守的Thr-Gly-Tyr(TGY)双磷酸化位点以及紧密相连的底物结合位点Ala-Thr-Arg-Trp(ATRW)。同源性以及系统进化树分析结果显示,尼罗罗非鱼的p38MAPK与大黄鱼(Larimichthys crocea)和鲈(Dicentrarchus labrax)的相似性最高。采用qRT-PCR的方法研究了ntp38MAPK在各组织以及无乳链球菌感染过程中的表达差异情况,结果显示,ntp38MAPK在各组织均有表达,其中在肌肉的表达量最高,心脏、肝脏、脾脏次之,头肾中的表达量最低。无乳链球菌感染过程中,脾脏、头肾中ntp38MAPK的表达量在2 h开始上调,肝脏中4 h开始上调,8 h后肝脏、脾脏和头肾中的表达量都有所下降,24～72 h趋于平稳,表明ntp38MAPK在尼罗罗非鱼抵抗链球菌侵染过程中发挥重要作用。

• 单位
  南京农业大学; 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心