猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒同步检测和鉴别诊断方法的建立

作者：史喜菊; 刘全国; 李炎鑫; 赖平安; 刘艳华; 徐立伟; 马贵平

来源：中国兽医科学, 2020, 50(12): 1515-1521.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0211

• 多重荧光RT-PCR
• 猪流感病毒
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 混合感染

为了准确鉴别猪流感病毒(SIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的感染,本研究建立了可同时检测和鉴别SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的一步法多重荧光RT-PCR方法,并进行了临床应用。研究结果表明,所建立的多重荧光RT-PCR最低检测限可达1～10 copies/?L,特异性为100%。SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV单荧光RT-PCR与多重荧光RT-PCR相比,相关性系数R2值大于0.999,所有扩增效率E值均在90%～100%之间,扩增性能良好,多重混合对特异性和敏感性未产生明显干扰。对病毒核酸样品的验证100%符合,从89份NA-PRRSV阳性样品中检测出NA-PRRSV阳性88份(88/89),从28份SIV阳性样品中检测出SIV阳性28份(28/28),从这两类阳性样品中检测出SIV和NA-PRRSV双阳性4份(4/117);从82份NA-PRRSV阴性样品中检测到EU-PRRSV和SIV阳性各1份;从105份未知感染状态的临床样品中筛查出2份SIV阳性和3份NA-PRRSV阳性。本研究建立的多重荧光RT-PCR方法实现了一次检测同时鉴别多种病毒的目的,适用于猪流感和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的快速筛查。