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摘要
为探究TaTLP8类甜蛋白在小麦抵御叶锈菌侵染过程中的功能，以小麦近等基因系TcLr26及其轮回亲本Thatcher(Tc)为材料，分别与叶锈菌生理小种260组成不亲和与亲和组合。经生物信息学分析、原核表达、亲和层析、动物免疫，制备了TaTLP8的兔源多克隆抗体，并使用制备的抗体，对小麦与叶锈菌互作的不亲和与亲和组合中TaTLP8的表达情况进行了分析。结果表明，小麦TaTLP8与大麦HvTLP8同源性较高且N-端含有信号肽。以无信号肽区段的TaTLP8基因(TaTLP8-nosp)构建重组质粒pET28a-TaTLP8-nosp,并以0.100 mmol/L的最适浓度IPTG对该蛋白在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。以纯化后的TaTLP8-nosp重组蛋白免疫新西兰兔制备了抗体。Western Blotting检测发现，该抗体可与小麦中TaTLP8蛋白特异性结合。使用制备的抗体检测了小麦-叶锈菌不同亲和性组合中TaTLP8的表达水平，发现TaTLP8在不亲和组合中自接种叶锈菌8 h后启动表达，其表达量逐渐升高；在亲和组合中，直至叶锈菌接种后48 h才检测到TaTLP8的蛋白信号，并且其表达水平逐渐下降。总体而言，TaTLP8在不亲和组合中的表达水平高于亲和组合，说明TaTLP8在小麦抵御叶锈菌侵染的过程中可能发挥正调控作用。
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单位生命科学学院; 河北农业大学
