乙型肝炎病毒核心蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

作者：平芳; 杨洵; 金佳佩; 蔡雪飞^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(12): 1370-1375.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003216

• 乙型肝炎病毒
• 核心蛋白
• 枯草芽孢杆菌
• 分泌表达

目的探讨在枯草芽孢杆菌中分泌表达乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBV core protein,HBc)的可行性。方法 PCR扩增HBc基因片段,插入pBE S-DNA穿梭质粒的MCS区域,构建重组质粒pBE S-DNA/HBc,将其线性化后与分泌信号肽DNA(SP DNA)连接产物转化大肠埃希菌Stellar感受态细胞,收获全部阳性菌落,并将提取的混合质粒转化至枯草芽孢杆菌RIK1285感受态细胞,ELISA法筛选分泌表达HBc蛋白的阳性菌落,选取分泌表达量最高的菌株放大培养,培养上清经亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE及Western blot分析重组蛋白HBc的分泌表达。结果经双酶切和测序鉴定,重组质粒pBE S-DNA/HBc构建正确。随机挑选的50株重组枯草芽孢杆菌经鉴定有16株含HBc基因,其中4株培养上清中检测到重组蛋白HBc的阳性表达。经SDS-PAGE分析,重组蛋白HBc在培养上清中呈单体、二聚体及多聚体状态;经Western blot分析,重组蛋白HBc能与HBc抗体特异性结合。结论重组蛋白HBc在枯草芽孢杆菌中可实现分泌表达,并具有抗原活性。

• 单位
  重庆医科大学