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摘要
目的：建立一种客观、准确、有效的平贝母位点特异性PCR鉴别方法。方法：收集平贝母及其他贝母材料，提取样品总基因组DNA,分析比对平贝母及其他贝母ITS片段，根据差异位点设计平贝母特异性引物，采用两步法进行PCR扩增，优化反应体系并对该方法进行耐受性和适用性考察。结果：建立了平贝母的位点特异性PCR鉴别方法：引物的序列为PB-Y1F:CGGGCGGACAATTTACTT,PB-Y1R:AGATAGAGAGCGGGCGTC;反应体系：2×Taq Plus Master Mix 12.5μL,上下游引物各1μL(10μmol),DNA模板1μL,ddH2O 9.5μL;扩增程序：95℃1 min; 95℃10 s, 57℃25 s, 30个循环；72℃15 s。平贝母均能扩增出约186 bp片段，其他贝母及阴性对照无条带，方法的适用性良好。结论：该实验设计的平贝母特异性引物专属性强，所建立的特异性PCR方法可以用于平贝母药材的准确鉴别。
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