荷瘤小鼠脾脏髓源抑制细胞的分选及鉴定

作者：刁建军; 杨雪; 宋学东; 陈仕友; 王胤; 王晓蓉; 罗春丽; 张尧; 吴小候

来源：免疫学杂志, 2014, 30(12): 1091-1095.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20140241

• MDSCs
• 脾脏
• 磁珠分选
• 鉴定

目的研究荷瘤小鼠脾脏中髓源抑制细胞(myeloid derived suppresser-cell,MDSCs)的分选与鉴定方法。方法常规培养小鼠肾癌细胞(Renca细胞),于Balb/c小鼠皮下建立小鼠肾癌模型;分离小鼠脾脏制成单细胞悬液,磁珠分选Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs;台酚蓝染色检测细胞存活率;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测其细胞纯度;显微镜下观察细胞形态;免疫荧光测其表面Gr-1、CD11b荧光表达情况;RT-PCR检测Cox2和Arg-1的m RNA的表达情况;小鼠皮下成瘤实验观察MDSCs促肿瘤生长。结果成功建立小鼠肾癌模型,磁珠分选后经FCM检测Gr-1+CD11b+双阳性的MDSCs细胞可达92.3%,显著高于分选前(P<0.01);免疫荧光鉴定结果显示:分选后的细胞形态完整,Gr-1和CD11b的荧光表达于细胞膜且2种荧光可以融合;RT-PCR检测分选后的MDSCs细胞群的Cox2和Arg-1的m RNA相对表达量显著高于分选前(P<0.05);小鼠皮下成瘤观察到MDSCs组与实验对照组有显著差异(P<0.05)。结论用免疫磁珠从荷瘤小鼠脾脏中成功分选得到MDSCs,具有较高纯度和良好的生物活性,为后续实验提供了理想的细胞来源。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第一医院