摘要
通过微生物异源表达胶原蛋白能够避免传统提取方法存在的有致病隐患和水溶性低的问题,也能突破化学合成方法对胶原蛋白长度的限制,使得对胶原序列的设计更加灵活。本文合成了截短的人源III型胶原蛋白N-HC3240基因,为提高其在毕赤酵母中的表达量,通过启动子改造策略,研究了启动子AOX1、DAS1、DAS2、FLD1、FDH1、THI4和THI11对N-HC3240在毕赤酵母GS115中表达的影响,结果表明AOX1启动子是N-HC3240时空表达量最优的启动子。此外,对AOX1启动子的启动表达,进行了溶氧、初始诱导菌体浓度、诱导pH值和甲醇浓度的优化,最终N-HC3240在摇瓶水平的产量达到0.28g/L,是优化前的2.5倍,并通过质谱鉴定了N-HC3240的序列。本研究为人源III型胶原蛋白在毕赤酵母中的异源高效表达提供了一定的研究基础。
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单位生物工程学院; 江南大学