钙周期素结合蛋白促进非小细胞肺癌增殖和侵袭

作者：许永杰; 胡雨萌; 秦朝; 王飞; 曹巍; 余一雯; 赵亮; 李江; 陈万青; 李霓^*; 赫捷^*

来源：中华肿瘤杂志, 2021, 43(09): 924-931.

• 癌, 非小细胞肺
• 钙周期素结合蛋白
• 增殖
• 侵袭

目的探讨钙周期素结合蛋白(CacyBP)对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。方法选取2016年于济南市中心医院行手术治疗的非小细胞肺癌患的肺癌组织和正常癌旁组织标本各6例, 采用Western blot法检测肺癌和正常癌旁组织中CacyBP蛋白的表达水平, Western blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常支气管上皮细胞16HBE和不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)中CacyBP蛋白和mRNA的表达水平。将siRNA、siCacyBP-1、siCacyBP-2、慢病毒包装质粒shNC和shCacyBP转染至A549细胞(分别记为siNC组、siCacyBP-1组、siCacyBP-2组、shNC组和shCacyBP组), 将对照质粒和Flag-CacyBP质粒转染至A549细胞(分别记为NC组和Flag-CacyBP组)。采用细胞计数试剂盒8法、平板克隆实验以及流式细胞术检测细胞增殖能力以及细胞周期情况, 细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力, Western blot法检测敲低或过表达CacyBP A549细胞中E-cadherin、N-cadherin、Snail1、Vimentin和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达。结果 CacyBP蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达水平为0.41±0.23, 高于正常癌旁组织(0.11±0.04, P<0.05)。不同非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H460和H1975)CacyBP蛋白的表达水平分别为0.35±0.01、0.38±0.01、0.32±0.01和0.41±0.01, 均高于16HBE细胞(0.03±0.01, 均P<0.05);RT-PCR结果与Western blot结果一致。与siNC组[吸光度(A)值为1.54±0.03]比较, siCacyBP-1组和siCacyBP-2组细胞增殖能力降低(分别为1.38±0.04和1.34±0.03, 均P<0.05)。shNC组细胞克隆形成数为(41.33±3.21)个, 高于shCacyBP组[(22.00±3.61)个, P<0.05]。shCacyBP组细胞G1期占比为(61.35±5.45)%, 高于shNC组[(49.61±1.54)%, P<0.05];S期占比为(25.41±3.21)%, 低于shNC组[(38.68±0.46)%, P<0.05]。shCacyBP组细胞迁移率为(12.67±0.71)%, 低于shNC组[(35.50±2.07)%, P<0.05]。shNC组细胞迁移和侵袭的数量分别为(406.33±7.37)个和(92.33±8.50)个, 高于shCacyBP组[分别为(224.67±10.01)个和(66.00±7.94)个, 均P<0.05]。与siNC组相比, 敲低CacyBP的表达, E-cadherin的表达水平升高, N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平降低(均P<0.05)。与NC组相比, Flag-CacyBP组E-cadherin的表达水平降低, N-cadherin、Vimentin、Snail1和p-Akt的表达水平升高(均P<0.05), PI3K/Akt通路抑制剂LY294002可逆转上述结果。结论 CacyBP通过调控Akt通路的活性促进非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。

• 单位
  基础医学院; 中国医学科学院北京协和医学院