人载脂蛋白A5基因的克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

作者：任东升; 官家发; 李德华; 梁波; 吴洽庆

来源：应用与环境生物学报, 2009, (01): 95-99.

• 载脂蛋白A5
• 原核表达
• 发酵
• 纯化
• 抗体. apolipoprotein A5
• prokaryotic expression
• fermentation
• purification
• antibody

人载脂蛋白A5(ApoA5)是血浆三酰甘油水平的重要决定因素之一,与心血管疾病密切相关,因此获得高纯度的载脂蛋白A5及其抗体具有重要的意义.本文利用PCR技术,从人肝癌细胞系7721的cDNA中扩增出ApoA5基因,并克隆到pThioHisD载体中导入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达.经优化条件,发酵得到高效表达的融合蛋白.利用融合蛋白上的一段组氨酸序列,用镍离子亲和柱进行纯化,得到纯度大于95%的融合蛋白.使用纯化蛋白免疫新西兰大耳兔,得到多克隆抗体,Western印迹结果显示此多克隆抗体能与ApoA5特异性结合.

• 单位
  中国科学院大学; 成都地奥制药集团有限公司; 中国科学院成都生物研究所