摘要
目的:探讨激酶非催化的C-叶域蛋白质1(KNDC1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老作用的分子机制。方法:体外分离培养HUVEC,选择第6代HUVEC转染KNDC1腺病毒为实验组,另设空白对照组与阴性对照组。显微镜下观察细胞形态变化,通过q PCR检测内皮细胞的KNDC1的mRNA的表达,用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况,Westem blot检测衰老相关蛋白,分光光度法检测内皮细胞抗氧化酶活性。结果:第6代的HUVEC呈现出有别于前期传代细胞的衰老特征,细胞变得扁平,体积增大,增殖能力降低;实验组KNDC1的mRNA水平较对照组增高(239%344%,P<0.05)及蛋白质表达也显著增高(249%441%,P<0.05),实验组HUVEC的SA-β-gal染色阳性率显著上升(P<0.01),与KNDC1腺病毒转染剂量呈剂量依赖性。实验组磷酸化p53较对照组增加[(244.3±19.5)vs.(113.5±9.0),P<0.05]及抗氧化酶SOD及GPX含量(0.84±0.079);(0.82±0.062)较对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:KNDC1过度表达可能通过启动p53信号通路增加ROS表达,进而加速细胞衰老的进程。
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单位郑州大学第一附属医院; 南方医科大学; 郑州人民医院