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摘要
目的：法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)是配体激活转录因子核受体超家族成员，属于胆汁酸受体。FXR在肾组织中表达，可通过调节糖脂代谢、抑制炎症反应、拮抗氧化应激及肾纤维化等机制减轻肾损伤。但FXR是否参与肾脏疾病中的自噬尚不明确。本研究旨在探讨FXR在顺铂所致急性肾损伤中的作用，并探讨其机制是否与调控自噬相关。方法：选取12周雄性野生型(wild type,WT)或FXR基因敲除(knockout of FXR,FXR-KO)小鼠各12只，随机分为WT组、WT+顺铂组、FXR-KO组、FXR-KO+顺铂组，每组6只，WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组予腹腔注射顺铂(20 mg/kg),WT组和FXR-KO组予腹腔注射等体积的顺铂溶剂。72 h后处死小鼠，留取血液和肾组织标本。采用免疫比浊法检测血清BUN和SCr水平，HE染色后在光学显微镜下观察肾组织病理改变，采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测LC3、p62的蛋白质表达水平，在电子显微镜下观察受损线粒体清除和溶酶体底物聚集的情况，采用TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡的情况。结果：WT+顺铂组相较于WT组，FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组，小鼠SCr和BUN均明显升高(P<0.01或P<0.001)，且FXR-KO+顺铂组小鼠SCr和BUN明显高于WT+顺铂组(均P<0.05)。在光学显微镜下可见WT组和FXR-KO组小鼠肾组织无明显病理改变，WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠均存在肾小管上皮细胞空泡样或颗粒样变性，细胞扁平，管腔扩张，刷状缘脱落，甚至出现基底膜裸露，管型形成。WT+顺铂组相较于WT组，FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组，小鼠肾小管损伤评分均明显升高(均P<0.001)，且FXR-KO+顺铂组评分明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。在透射电镜下可见WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠小管上皮细胞线粒体肿胀变圆、空泡化、嵴断裂或消失，溶酶体呈不均匀、高密度团块状，且以FXR-KO+顺铂组改变更为明显。蛋白质印迹法结果显示：WT+顺铂组相较于WT组，FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组，小鼠肾皮质LC3-II/LC3-I比值下降，p62表达增加(P<0.05或P<0.01)；且相较于FXR-KO组，FXR-KO+顺铂组小鼠LC3-II/LC3-I比值下降，p62表达增加更为明显(均P<0.05)。免疫组织化学结果显示：WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组小鼠肾皮质总LC3和p62表达均明显增加，且以FXR-KO+顺铂组增加更为显著。TUNEL结果显示：WT组和FXR-KO组小鼠染色阴性或仅见数个小管上皮细胞凋亡，WT+顺铂组和FXR-KO+顺铂组凋亡细胞数量均增多；WT+顺铂组相较于WT组，FXR-KO+顺铂组相较于FXR-KO组，肾小管上皮细胞凋亡率明显增加(均P<0.001)，且FXR-KO+顺铂组凋亡率明显高于WT+顺铂组(P<0.05)。结论：FXR基因敲除加重顺铂所致急性肾损伤，其机制可能与抑制自噬和促进凋亡有关。
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