水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定

作者：李建宇; 李波; 陈华民; 杨凤环; 何晨阳; 田芳

来源：生物技术通报, 2016, 32(12): 124-129.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.12.020

• 水稻白叶枯病菌
• c-di-GMP
• 信号受体蛋白
• 点突变体
• 结合作用

旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化;通过等温滴定量热法(ITC),检测了Clpxoo及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法,在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明,Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点。

• 单位
  植物病虫害生物学国家重点实验室; 中国农业科学院植物保护研究所