利用免疫共沉淀验证HT036与P311间的相互作用

作者：袁顺宗; 彭旭; 马兵; 王**; 易绍萱; 贺伟峰; 陈希炜; 胡晓红; 张小容; 周丽娜; 罗高兴; 吴军

来源：第三军医大学学报, 2006, (24): 2400-2402.

• HT036
• P311
• 载体构建
• 免疫共沉淀
• 相互作用

目的利用免疫共沉淀技术验证未知蛋白HT036(hypotheticalprotein,HT036)和P311间的相互作用。方法构建能在哺乳动物细胞中表达带HA标签的HT036融合蛋白(HA-HT036)的重组载体pCMV-HA-HT036,经酶切鉴定正确后,和表达带Myc标签的P311融合蛋白(Myc-P311)的重组真核表达载体pCMV-Myc-p311,单独或者共转染人293细胞,利用免疫共沉淀技术验证HT036与P311间的相互作用。结果构建的重组表达载体pCMV-HA-HT036经双酶切鉴定正确,转染293细胞,抗Myc单克隆抗体沉淀Myc-P311相互作用蛋白复合物后,用抗HA单克隆抗体进行Westernblot检测,可以检测到HA-HT036的表达。结论成功构建了HA-HT036融合蛋白真核表达重组载体,在哺乳动物细胞中表达后利用免疫共沉淀技术证实HT036与P311之间存在着相互作用。

• 单位
  第三军医大学西南医院