大黄鱼头肾细胞系瞬时转染方法的选择及优化

作者：王贤慧^*; 慕鹏飞; 敖敬群

来源：生物技术, 2023, 33(03): 287-321.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.03.0043

• 大黄鱼头肾细胞
• 细胞转染
• 绿色荧光蛋白
• 瞬时转染

[目的]为了选择适合大黄鱼头肾细胞(LYCK)的转染试剂并优化转染条件，用于开展后期大黄鱼细胞生物学研究。[方法]分别将LipofectamineTM 2000、FuGENE HD、X-tremeGENE 9及X-tremeGENE HP与带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)编码基因的质粒pEGFP-N1转染LYCK细胞。[结果]48 h后通过倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况，发现4种转染试剂中X-tremeGENE HP的转染效果(转染效率～1%,细胞生存率>80%)优于其他三种(转染效率<1%,细胞生存率<50%)。在此基础上进一步优化转染条件发现：当DNA质量(μg)和X-tremeGENE HP体积(μL)的比例为1∶7时，转染效率～10%且细胞生存率>60%。转染试剂联用的方法证实，X-tremeGENE HP和LipofectamineTM 2000联用转染效率(转染效率～3%)高于其他混合转染组(转染效率<1%)。[结论]综合考虑转染效果、细胞毒性及经济效益，选用X-tremeGENE HP作为转染介质，DNA质量与X-tremeGENE HP体积比例为1∶7时，能够在LYCK细胞中实现最佳转染效果，这一结果为在利用LYCK细胞开展大黄鱼相关免疫基因研究提供了有效的技术手段。

• 单位
  福建农林大学; 湖北医药学院; 自然资源部第三海洋研究所