新型冠状病毒3C样蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：郑皖怿; 李瑞芳; 徐海山; 宋桃花; 高岩; 陈柯; 伊正君; 付玉荣^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(01): 18-21.

DOI：10.13350/j.cjpb.220105

• 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)
• pro)" name="keyword">3C样蛋白酶(3CLpro)
• 原核表达
• 多克隆抗体

目的 表达及纯化新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)3C样蛋白酶(3-chymotrypsin-like protease, 3CLpro)并制备3CLpro多克隆抗体。方法 将重组质粒pET28a-Proteinase＿3CL-pro转化大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导重组蛋白表达，超声破碎后用SDS-PAGE凝胶分析蛋白表达情况，利用Ni-NTA进行重组蛋白的纯化。用重组蛋白免疫4～8周龄健康小鼠，制备多克隆抗体，通过Western blot和ELISA对抗体进行定性和定量检测。结果 重组蛋白His-3CLpro在重组菌培养上清中高表达，分子质量单位为33.8 ku。制备的多克隆抗体可特异结合重组蛋白3CLpro,ELISA检测血清抗体效价可达1∶204 800。结论 在大肠埃希菌中成功表达3CLpro,免疫小鼠并制备高效价的鼠抗3CLpro多克隆抗体，为研究3CLpro功能进而开发新型冠状病毒检测试剂盒及治疗药物奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 潍坊医学院